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麥氏比濁管估計懸液中的細菌濃度

發布時間:2019-12-02    瀏覽次數:1379

在我們日常的微生物檢測工作和進行的某些實驗中,經常會遇到需要預估細菌懸液的細菌濃度問題,有時候我們需要精確計數細菌菌液濃度,會用到血球計數板來進行計數;但有時我們只需要一個比較粗略的估計值即可,這里小編推薦大家使用麥氏比濁法。

麥氏比濁管是McFarland發明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標準濁度管。具體的配制方法是根據硫酸和氯化鋇的比例來定的,有表可查,這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同,且都有定值。麥氏比濁管的配比如下:

這是傳統的麥氏比濁管的配制方法,目前也有市售的商品化產品,不需要自己配制,并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥氏比濁管,與傳統的麥氏比濁管相比,保存時間更長也更穩定。但麥氏比濁管具體應該怎么使用呢?

麥氏比濁管估計懸液中的細菌濃度具體操作方法

1、輕搖標準試管。

2、無菌操作將被測定的肉湯培養物加到與標準管相同直徑(大?。┑臒o菌試管中。

3、以無菌操作向被測定試管加入無菌生理鹽水(NaCl),直到濃度與所要求的標準管的濃度相同。

4、直接用眼睛看(需要經驗,誤差較大)。

5、找張白紙,打上平行直線,然后觀察讀數(如圖示,利用光在不同濃度液體折射不同)。

例如,需配大約100cfu/mL 的細菌菌液濃度:

1. 無菌操作用接種環挑取測試細菌的純培養物到盛有一定量無菌生理鹽水管中,混懸。

2. 以比色卡作為背景目測,直到濁度與0.5 麥氏比濁標準管的濁度相一致,如上圖所示。

3. 0.5 號麥氏濁度標準管相當于1×108CFU/mL 濃度,以此為參照值,取1mL 濁度跟0.5 號麥氏濁度標準管相一致的菌懸液到9mL 無菌生理鹽水管中,作10 倍梯度稀釋107、106、105……,102 稀釋度含菌量大約為100cfu/mL。

注:1. 測試菌的純培養物可以是凍干菌株復蘇后純培養物。

       2.本法僅供細菌液濃度的粗略計算。

注意事項:

1、如果測定的肉湯培養物不澄清,由培養物的值減去未接種培養基的值來校正細菌濃度。

2、如果肉湯顏色很深,把未接種試管放在標準管的后面讀數即可。

3、測定好的細菌,最好做一下梯度稀釋涂布計數。

4、此種方法測定的準確性不是很高,如果是對細菌數量要求較精確的,請用紫外分光光度計。

5、麥氏比濁液應放室溫暗處保存,用前混勻,有效期為6個月。應用時為了準確也可以使用比濁儀但一定要防止麥氏濁度標準管未搖勻或已過期失效。

在微生物學檢驗中,麥氏比濁法常作為細菌鑒定、實驗配制菌液時大致判斷細菌菌液濃度的一種方法,通常認為,如將配細菌菌液濃度配成0.5麥氏比濁管時,相當于1.0×108細菌數/ml,由于方法本身就是一種估計的方法,所以盡管不同細菌大小差異很大,但除了真菌孢子,細菌的差別不大,結果不會有影響。

附孢子菌懸液制作方法:

1. 菌種活化

將保藏菌接種在PDA斜面培養基試管中,培養7d~14d,使生成大量孢子。未制備孢子懸液時,不得拔去棉塞。每打開1支只供制備1次懸液,每次制備孢子懸液必須使用新培養的霉菌孢子。

2. 孢子懸液制備

在上述PDA斜面培養基中加入少量無菌蒸餾水,用無菌接種環輕輕刮取表面的新鮮霉菌孢子,將孢子懸液置于250mL錐形瓶內,然后注入40mL洗脫液。

錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10?!?5粒與孢子混合,具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團的孢子散開,然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中,用離心機分離沉淀孢子,去上清液。再加入40mL洗脫液,重復離心操作3次。制成濃度為(0.8~1.2)×106spores/mL的霉菌孢子懸液。若需要精確計數,則可以用改良察氏液體培養基稀釋孢子懸液,用血球計數板計數。孢子懸液應在當天使用,若不在當天使用應在 3℃~7℃保存,并盡量在4d內使用。


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